伤寒沙门菌质粒诱导巨噬细胞凋亡
眭 阳 吴淑燕 宋国蓉 李嫄渊 吕 杰 黄 瑞*
苏州大学基础医学与生物科学学院病原生物学系, 苏州215123
摘要 : 为探讨伤寒沙门菌质粒pRST98上毒力基因与小鼠巨噬细胞J774A.1凋亡的关系及可能机制， 将鼠伤寒沙门菌标准毒株SR-11、低毒株RIA和pRST98
经接合转移导入RIA的接合子pRST98/RIA， 体外分别与小鼠巨噬细胞J774A.1共培养， Giemsa染色法确定细菌对细胞的感染复数(multiplicity，
MOI)。于0、1、3、6、12和24 h用Annexin V-FITC试剂盒检测细菌感染后细胞凋亡情况;
用透射电镜观察细胞的变化; 用JC-1染色法、激光扫描细胞仪及激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(ΔΨm)的改变。结果显示， 细菌与J774A.1的最佳MOI为100∶1。从感染后3 h起， J774A.1的凋亡率表现为SR-11组＞pRST98/RIA组＞RIA组(P<0.05); 电镜观察的结果显示3 h起各组细胞内可见染色质边聚等凋亡改变， 12 h见凋亡小体， 以SR-11组最为明显， pRST98/RIA组多于RIA组， 24 h各组细胞多为坏死改变; 感染后J774A.1线粒体ΔΨm下降的百分率表现为SR-11组、pRST98/RIA组和RIA组依次降低。以上结果表明携带质粒pRST98的宿主菌毒力增强， 感染后使巨噬细胞的凋亡率随时间延长而增加。
经接合转移导入RIA的接合子pRST98/RIA， 体外分别与小鼠巨噬细胞J774A.1共培养， Giemsa染色法确定细菌对细胞的感染复数(multiplicity，
MOI)。于0、1、3、6、12和24 h用Annexin V-FITC试剂盒检测细菌感染后细胞凋亡情况;
用透射电镜观察细胞的变化; 用JC-1染色法、激光扫描细胞仪及激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(ΔΨm)的改变。结果显示， 细菌与J774A.1的最佳MOI为100∶1。从感染后3 h起， J774A.1的凋亡率表现为SR-11组＞pRST98/RIA组＞RIA组(P<0.05); 电镜观察的结果显示3 h起各组细胞内可见染色质边聚等凋亡改变， 12 h见凋亡小体， 以SR-11组最为明显， pRST98/RIA组多于RIA组， 24 h各组细胞多为坏死改变; 感染后J774A.1线粒体ΔΨm下降的百分率表现为SR-11组、pRST98/RIA组和RIA组依次降低。以上结果表明携带质粒pRST98的宿主菌毒力增强， 感染后使巨噬细胞的凋亡率随时间延长而增加。
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