融合蛋白CTP-FoxM1诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞的活化

摘要 : 树突状细胞(dendritic cells, DCs)疫苗负载的肿瘤抗原可以使DCs大量表达表面分子II类组织相容性抗原(major histocompatibility complex class-II, MHC-II)及共刺激分子CD40、CD80、CD86, 促进Th1(T helper 1)型细胞因子的分泌, 从而可以将肿瘤抗原充分递呈给T淋巴细胞, 诱导机体产生杀伤肿瘤细胞的免疫应答。其中, 肿瘤抗原是否能充分活化DCs是机体发挥抗肿瘤免疫应答的关键。该研究以融合蛋白CTP-FoxM1(cytoplasmic transduction peptide-forkhead box M1)为研究对象, 探讨其对C57BL/6小鼠骨髓来源DCs的活化作用。首先, 分别将胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide, CTP)、FoxM1(forkhead box M1)抗原相关基因连接入pCOLD-TF-DNA, 构建重组原核表达质粒pCOLD-TF-CTP-FoxM1, 转化感受态大肠杆菌BL21, IPTG(isopropyl β-Dl-thiogalactopyranoside)诱导表达, 经亲和纯化、Western blot验证得到融合蛋白CTP-FoxM1。然后, 用CCK-8试剂盒检测经不同浓度的融合蛋白CTP-FoxM1处理48 h后的DCs的存活率; 用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白CTP-FoxM1在DCs的定位情况; 流式细胞仪检测DCs表面MHC-II类分子和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达情况; ELISA法检测DCs培养上清中细胞因子白介素-12(interleukin-12, IL-12)的分泌水平。结果显示: CTP-FoxM1对DCs的生长有一定的抑制作用, 且与其浓度有关, 浓度为1 μg/mL的融合蛋白CTP-FoxM1处理组的DCs存活率(80.93%±8.36%)明显高于浓度为2 μg/mL融合蛋白CTP-FoxM1处理组DCs的存活率(70.13%±5.38%, P<0.001)和4 μg/mL融合蛋白CTP-FoxM1处理组DCs的存活率(62.97%±4.06%, P<0.001)。在激光共聚焦显微镜下可以观察到该融合蛋白能够在DCs胞质内定位, 与对照组相比, 该融合蛋白可以上调DCs表面MHCII类分子和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达量(P<0.01, P<0.05)及细胞因子IL-12的分泌量(P<0.001)。结果提示, 融合蛋白CTP-FoxM1能促进DCs的活化, 对肝癌的免疫治疗有一定的潜能, 为下一步探索融合蛋白CTP-FoxM1负载的DCs是否能够在体内发挥免疫效应奠定了一定的基础。

CSTR: 32200.14.cjcb.2015.05.0006