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利用CRISPR/Cas9系统和TALEN技术干预XIST基因的表达


剌 婷1 马健阳1 沈 南1,2 唐元家1,2*
1上海交通大学医学院/中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所, 分子风湿病学研究组, 上海 200025;2上海交通大学医学院附属仁济医院, 上海市风湿病研究所, 上海 200001
摘要 : XIST是维持雌性哺乳动物X染色体稳定失活的重要长链非编码基因。X染色体失活异常导致X连锁基因的过量表达从而参与了癌症等疾病的发生。干预XIST的表达在XIST的生物学功能和相关疾病发生的研究中是必不可少的。该研究利用CRISPR/Cas9系统和TALEN技术在293T细胞中对已知的XIST核心启动子进行编辑, 建立了通过酶切、测序等鉴定突变效率的方法, 并且结合极限稀释法、片段分析和TA克隆测序得到基因型确定的XIST低表达的单克隆细胞系。结果显示,CRISPR/Cas9和TALEN对XIST核心启动子的突变可以有效地抑制XIST的表达。该研究表明, 针对XIST核心启动子的基因组编辑可以干预XIST的表达, 这为长链非编码RNA基因的敲低提供了新的思路。


CSTR: 32200.14.cjcb.2014.12.0010