农杆菌介导的芥蓝遗传转化体系的建立

黄　科^1,2,3　叶纨芝¹　余小林¹　向　珣¹　卢　钢¹　曹家树^1*

¹浙江大学蔬菜研究所, 杭州310029; ²福建农林大学农产品品质研究所, 福州 350002; ³福建省农业科学院蔬菜研究中心, 福州 350013

摘要 : 采用正交旋转设计方法对影响芥蓝遗传转化体系的因素进行了优化研究，结果表明: 影响芥蓝KanR苗率的最主要因素是Kan浓度，而预培养时间和共培养时间是芥蓝遗传转化的主要影响因素。最利于芥蓝遗传转化的操作程序为: 将芥蓝无菌苗下胚轴在预培养基上预培养2 天后，在LBA4404菌液中感染8 min，置于共培养培养基上培养2 天，随后把外植体转入含Kan的选择分化培养基上诱导不定芽， 28 天转瓶一次，当抗性幼苗长至2~3 cm时，齐愈伤组织处切下幼苗在生根培养基上诱导不定根， 25 天左右后等不定根长成即可开瓶炼苗，继而移栽至营养土中，正常管理至开花结果; 经PCR、Southern 印迹检测，证明CYP86MF基因已经整合至转基因植株染色体中。