人PAK1重组蛋白质的表达及在人胃癌BGC-823细胞内定位
王桂玲 周 颖 赵大林1 李家滨 刘芙蓉 李 丰*
中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室, 沈阳 110001; 1沈阳体育学院生理学教研室, 沈阳110001
摘要 : 为检测人PAK1在原核细胞中的表达情况及在真核细胞中的定位， 利用RT-PCR技术获得PAK1目的基因， 构建GST融合蛋白原核表达载体pGEX-5X-1/PAK1， IPTG诱导后进行SDS-PAGE及Western 印迹检测， 并用体外激酶实验测定其生物学活性; 同时， 构建带绿色荧光蛋白(GFP)标签的真核表达载体pEGFP/PAK1， 利用脂质体法转入人胃癌BGC-823细胞系中， 在共焦激光扫描显微镜下观察癌细胞中绿色荧光蛋白的表达。结果表明， pGEX-5X-1/PAK1载体能在大肠杆菌BL-21中正确表达GST-PAK1融合蛋白， 大小约为94 kDa， 具有生物活性; PAK1绿色荧光蛋白定位于细胞浆。上述研究为进一步探索PAK1的生物学特性及信号转导通路打下了基础。
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