氨基糖苷-(3)-乙酰转移酶II的表达纯化及初步活性

王　震^1,2　陈云波^1,2　查长森^1,2　邹立林^1,2　彭　颖^1,2 季敬璋^1,2　陈秀枢³　吕建新^1,2*

温州医学院, ¹浙江省医学遗传学重点实验室, ²细胞与分子医学研究所, ³微生态学研究所, 温州 325035

摘要 : 用PCR扩增的氨基糖苷-(3)-乙酰转移酶II[aac(3)-II]基因构建了能表达较高活性AAC(3)-II的重组工程菌，并获取重组AAC(3)-II。含pET28a质粒的工程菌转入aac(3)-II基因前后对氨基糖苷类抗生素的最低抑菌浓度进行比较，重组菌超声裂解上清液及其纯化的AAC(3)-II进行SDS-PAGE和Western 印迹电泳鉴定。最低抑菌浓度表明转入aac(3)-II基因的工程菌比未转入的工程菌对庆大霉素(gentamicin， GEN)的提高了256倍，对妥布霉素(tobramycin， TOB)及其奈替米星(netilmicin， NTL)提高了16倍，电泳鉴定表明纯化获取的是重组AAC(3)-II，其相对分子质量约为32 kDa，纯度大于95%，纯化后的10 μg AAC(3)-II，分别在10 s内使80 μg GEN、30 s内使80 μg TOB和NTL乙酰化而失去抑菌作用。研究为氨基糖苷类抗生素伴侣的开发研究初步打下基础。