慢病毒介导shRNA特异性干扰MRPL18基因对胰岛素瘤细胞线粒体能量代谢的影响
施孟如 陈 琳 周林双 杨 宇 吕建新 李 伟*
温州医科大学检验医学院、生命科学学院, 浙江省遗传学重点实验室, 温州 325035
摘要 : 为了观察线粒体核糖体蛋白大亚基18(mitochondrial ribosomal proteins L18, MRPL18)基因低表达对小鼠胰岛素瘤细胞(MIN6)线粒体能量代谢的影响, 该研究利用慢病毒介导的MRPL18shRNA特异性干扰MRPL18基因, 构建MRPL18基因低表达的MIN6细胞模型。Real-time PCR和Western blot检测干扰前后MRPL18 mRNA和蛋白质的表达情况。流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平变化。海马生物能量代谢仪检测细胞线粒体功能。高效液相色谱检测细胞ATP、ADP和AMP含量。结果显示: 转染MRPL18-shRNA后, MRPL18 mRNA和蛋白质表达均显著降低(P<0.05、P<0.01), 细胞ROS明显升高(P<0.05); 细胞氧耗率、基础呼吸、最大呼吸和储备呼吸能力显著降低, 同时ATP产量和质子漏也减少(P<0.05、P<0.01)。细胞ATP含量和能荷较对照组减少, ADP和AMP含量显著增加(P<0.05、P<0.01)。证实了MRPL18基因表达下调后细胞内发生了代谢障碍。推测MRPL18是影响线粒体功能的关键蛋白质, 该蛋白在细胞代谢过程中发挥着重要作用。MRPL18表达下降所建立的线粒体功能障碍的MIN6细胞模型, 可用于线粒体糖尿病发病分子机制的研究。
中文版
英文版