肌成纤维细胞促进小鼠胚胎肝干细胞的增殖和分化

摘要 : 移植细胞的增殖和分化需要微环境支持。作为最重要的微环境成分, 肌成纤维细胞在肿瘤的生长过程中发挥着重要作用。该实验Hepa1-6肿瘤细胞上清液在体外激活成纤维细胞分化为肌成纤维细胞, 探讨肌成纤维细胞上清对小鼠胚胎肝干细胞(embryonic hepatic stem cells,EHSCs) HP14.5增殖和分化的影响。实验将EHSCs HP14.5分为三组: DMEM培养液处理组(DMEM组)、成纤维细胞上清液处理组(CMFb组)及肌成纤维细胞上清液处理组(CMAFb组)。MTT法绘制三组HP14.5细胞生长曲线图, 免疫荧光法及Real-time PCR法检分别测白蛋白(albumin, ALB)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP) 、细胞角蛋白18(cytokeratin 18, CK18)的蛋白及mRNA表达情况, PAS染色法检测糖原合成状况。MTT法检测显示, CMAFb组胚胎肝干细胞增殖明显速度较其他两组快。免疫荧光染色及Real-time PCR结果显示, HP14.5培养5 d后, CMAFb组ALB和CK18的蛋白及mRNA表达水平以及糖原合成水平显著高于CMFb组及DMEM组, 而AFP蛋白和mRNA表达水平明显降低。该实验表明, Hepa1-6激活的成纤维细胞能促进胚胎干肝细胞的增殖以及分化为有功能的成熟肝细胞。