大鼠精原干细胞的微滴培养法

摘要 : 精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs)作为成体干细胞的一类, 既具有自我更新和分化的潜能, 又可向子代传递遗传信息。阐明其增殖过程及分化特性对SSCs的进一步应用具有重要意义。小鼠SSCs的微滴培养研究显示, 微滴培养技术与常规培养方法相比具有独特的优势。然而其他物种的SSCs能否实现微滴培养尚有待证实。该研究旨在利用微滴培养法建立大鼠SSCs体外培养技术。5、8、10、20、40个大鼠SSCs分别置于20 μL微滴中培养, 用丝裂霉素处理的STO细胞作为滋养层。倒置显微镜观察记录大鼠SSCs的增殖状态。一个月后, 对微滴培养的SSCs进行免疫荧光双标记染色鉴定。结果显示, 一个微滴内接种5个SSCs就能实现扩增培养; 培养一个月后,SSC仍然表达其特异的标记基因分子如CDH1、OCT4、PLZF、Thy1和Gfra1。体外诱导分析显示,微滴培养的大鼠SSCs具有分化为精母细胞的能力。大鼠SSCs微滴培养法的建立, 为其他物种SSCs的培养提供了借鉴, 也为再生医学和生命科学相关领域的研究提供了技术平台。