胎儿肺组织来源间充质干细胞的分离、培养、鉴定及重编程初探
池 颖# 杨少光# 徐方运 王有为 韩之波 赵钦军 马凤霞 陈 芳 卢士红 韩忠朝*
中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院, 实验血液学国家重点实验室, 天津 300020
摘要 : 该文主要研究将进行胎儿肺部组织来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells derived
from fetal lung, FL-MSCs)转变成为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPS细胞)。首先使用酶消化法对胎儿肺部组织进行分离, 然后采用常规方法进行培养并成功获得成纤维细胞样细胞。使用共聚焦技术检测获得的细胞, 发现角蛋白表达呈阴性; 共聚焦技术检测c-Myc、Oct4、Nanog以及Nestin四个干性相关因子, 发现它们呈阳性; 检测成纤维细胞样细胞的免疫表型, 符合间充质干细胞的表型判断标准; 然后进行诱导分化实验, 发现这些细胞可以向成脂、成骨细胞分化,经过以上实验鉴定获得的成纤维细胞为FL-MSCs。使用Yamanaka四因子体系对FL-MSCs进行诱导,可以形成类似人胚胎干细胞(human embryonic stem cells, hES细胞)的克隆, 采用核型分析、STR检测分析以及畸胎瘤形成实验初步验证获得的克隆为iPS。
from fetal lung, FL-MSCs)转变成为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPS细胞)。首先使用酶消化法对胎儿肺部组织进行分离, 然后采用常规方法进行培养并成功获得成纤维细胞样细胞。使用共聚焦技术检测获得的细胞, 发现角蛋白表达呈阴性; 共聚焦技术检测c-Myc、Oct4、Nanog以及Nestin四个干性相关因子, 发现它们呈阳性; 检测成纤维细胞样细胞的免疫表型, 符合间充质干细胞的表型判断标准; 然后进行诱导分化实验, 发现这些细胞可以向成脂、成骨细胞分化,经过以上实验鉴定获得的成纤维细胞为FL-MSCs。使用Yamanaka四因子体系对FL-MSCs进行诱导,可以形成类似人胚胎干细胞(human embryonic stem cells, hES细胞)的克隆, 采用核型分析、STR检测分析以及畸胎瘤形成实验初步验证获得的克隆为iPS。
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