miR-125b慢病毒表达载体的构建及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖和迁移的影响
何小茜1 余秋波2 杨 戎1*
1重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心, 2重庆医科大学生命科学院, 重庆 400016
摘要 : 构建并鉴定miR-125b慢病毒过表达载体, 研究miR-125b对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响及其可能机制。将PCR扩增的miR-125b前体序列与经过酶切后的GP-Supersilencing Vector进行连接, 产生miR-125b重组慢病毒表达载体。将重组慢病毒载体质粒、pGag/Pol、pRev和pVSV-G共转染293T细胞, 包装产生慢病毒。使用收获的病毒颗粒感染卵巢癌SKOV3细胞, 嘌呤霉素筛选稳定感染细胞株; 实时荧光定量PCR(Real-time qPCR)检测miR-125b在SKVO3细胞中的表达; Western blot检测其潜在靶基因HER-2的表达; MTT实验和Transwell侵袭实验分别观察miR-125b过表达后SKOV3细胞增殖和迁移能力的改变。该研究成功构建miR-125b慢病毒过表达载体, 感染卵巢癌SKOV3细胞后, 能够过表达miR-125b, 并抑制SKOV3细胞的增殖及迁移, 降低潜在靶基因HER-2的表达。该研究证明, miR-125b能够抑制SKOV3细胞的增殖及迁移, 并可能通过降低潜在靶基因HER-2的表达而实现。
中文版
英文版