兔Oct4启动子驱动RFP基因表达载体的构建及验证

唐澜¹ 姜伟华² 尹明茹² 周小梅¹ 李和平^1* 陈学进² 李善刚^2*

¹东北林业大学野生动物资源学院, 哈尔滨 150040; ²上海交通大学医学院实验动物科学部, 上海 200025

摘要 : 转录因子OCT4在维持和调控胚胎干细胞的多能性中发挥着重要的作用。Oct4基因启动子驱动标志蛋白的表达对研究胚胎干细胞多能性和建立iPS细胞有重要意义。由于GFP在慢病毒转染过程中常用作转染标记, 计划构建兔Oct4基因启动子(rOct4)驱动红色荧光蛋白表达的载体, 这将有利于兔ES细胞和iPS细胞制备的研究。通过PCR方法扩增rOct4, 构建了rOct4驱动RFP基因的表达载体rOct4-RFP。经转染小鼠ES细胞验证正确后, 将rOct4-RFP质粒转染兔成纤维细胞系获得rOct4-RFP成纤维细胞系。经过酶切和测序验证, 证明rOct4-RFP构建成功, 而且能够在小鼠ES细胞系E14中表达细胞红色荧光蛋白, 并受细胞分化状态的调控。通过脂质体介导的基因转移、抗性筛选和PCR鉴定建立了rOct4-RFP转基因成纤维细胞系。