海藻酸微囊法冷冻保存绵羊精原干细胞

摘要 : 细胞冷冻保存技术是动物研究的重要组成部分。该研究首次应用海藻酸微囊冷冻保存绵羊精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs), 旨在提高绵羊SSCs的冷冻保存效率。冻存前后对绵羊SSCs存活率进行评估, 在绵羊SSCs液氮冻存10 d后进行细胞培养和CDH1、PLZF、GFRα1、OCT-4、Thy-1五个精原干细胞特异分子标记蛋白的免疫荧光鉴定。结果表明, 在液氮冻存1 d后, 绵羊SSCs存活率从58.4%±1.4%(单细胞悬液冻存组)提高到78.7%±1.3%(海藻酸微囊包埋冻存组); 液氮冻存10 d后, 单细胞悬液冻存组细胞存活率降低至48.1%±0.8%, 而海藻酸微囊包埋组细胞存活率仍保持在78.0%±1.5%。对液氮冻存10 d后的细胞进行体外培养, 培养4 d后, 海藻酸微囊包埋冻存组能形成典型的精原干细胞簇。进行细胞免疫荧光鉴定, 发现在微囊包埋冻存10 d后CDH1、PLZF、GFRα1、OCT-4、Thy-1均显示阳性。海藻酸微囊的应用显著提高了绵羊SSCs的冷冻保存效率, 且对绵羊SSCs的标记基因表达无显著影响。该方法的建立为其他家畜及濒危动物种质资源保存提供了依据。