放线菌素D诱导非洲绿猴肾细胞(Vero)凋亡模型的建立

摘要 : 用不同剂量(0, 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 mg/L)的放线菌素D(actinomycin D, ActD)诱导Vero细胞凋亡不同时间(0, 12, 24, 36, 48, 60 h)。MTT法和流式细胞术的结果显示, 以未处理的细胞作为对照组, 各剂量ActD处理Vero细胞不同时间后, 细胞的活力均下降, 凋亡率均升高, 且呈剂量和时间依赖效应。当ActD浓度为1 mg/L、作用时间为36 h, 细胞的存活率为(0.55±0.01), 凋亡率为(34.83±1.13)%。Gimesa染色、Hoechst33258染色表明, 经ActD(1 mg/L)诱导36 h后Vero细胞形态学发生明显改变, 出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征; Real-time PCR结果显示, 诱导组Bax/Bcl-2 mRNA相对含量明显大于正常对照组, 且差异有统计学意义; 分光光度法结果表明, 与正常对照组相比较, 凋亡诱导组caspase-3和caspase-8活性明显升高且差异具有统计学意义, caspase-9活性与对照组相比较, 差异无统计学意义。用1 mg/L ActD诱导Vero细胞36 h时, 细胞存活率和凋亡率都很高, 可作为ActD诱导Vero细胞的最佳剂量。在该剂量及作用时间下, caspase-3和caspase-8活性明显升高, 表明ActD诱导Vero细胞凋亡是通过caspase-8相关的途径。该实验成功建立了ActD诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型, 将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。