小鼠诱导多能干细胞体外分化为心肌细胞的实验研究
熊挺淋1 张丽莎1 刘 涛1* 王浩宇1 赵超美1 周振宇1 赵 霞2 杨 梁2
1南充市中心医院心内科· 川北医学院第二临床医学院, 南充 637000;2重庆市神经病学重点实验室, 重庆 400016
摘要 : 观察血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和维生素C对小鼠诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSCs)体外分化为心肌细胞的诱导作用。采用直接悬浮培养法使iPSCs形成拟胚体(embryoid bodies, EBs), 分别以VEGF和维生素C作为诱导剂, 自然分化作为阴性对照组, 加入1%二甲亚砜诱导剂为阳性对照组。倒置显微镜下观察细胞生长情况, 记录跳动的拟胚体出现的时间和数目, 计算心肌细胞分化率, 细胞免疫荧光检测心肌特异性蛋白cTnT的表达, RT-PCR检测心肌特异性基因β-MHC mRNA的表达。在LIF条件下, iPSCs在饲养层上成集落状生长; 未分化的iPSCs中Oct-4及AKP呈阳性表达; 与自然分化组相比, 二甲亚砜、VEGF和维生素C均能提高iPSCs的心肌细胞分化效率(P<0.05); 分化的心肌细胞可自发搏动, 同时分化细胞中表达心肌特异性蛋白cTnT以及心肌特异性基因β-MHC。VEGF和维生素C可以促进iPSCs向心肌细胞分化。
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