荧光定量PCR精确检测人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数方法的建立

孙　懿^1,2,3　曾思聪^1,2,3　胡　亮^1,2,3　卢光琇^1,2,3　林　戈^1,2,3*

¹中南大学生殖与干细胞工程研究所, 长沙 410078; ²人类干细胞国家工程研究中心, 长沙 410078; ³卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室, 长沙 410078

摘要 : 建立一种精确定量人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的方法。构建包含线粒体DNAND1和核单拷贝基因β-globin基因序列的重组质粒作为标准品; 收集无饲养层培养体系下人胚胎干细胞DNA样本，结合2个单独的Taqman探针实时荧光定量PCR对待测样本中线粒体ND1和核β-globin基因分别进行定量，从而对人胚胎干细胞线粒体DNA的含量进行了精确定量。结果提示，人胚胎干细胞线粒体DNA的平均拷贝数/细胞为1 321±228。研究表明，该技术可对人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数进行准确的测定，为研究培养条件对人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的影响及优化体外培养条件奠定了基础。