融合蛋白lhFVII-LDM的制备及其对乳腺癌细胞的抑制作用
胡 莲 廖东升 吴传芳*
四川大学生命科学院功能基因组实验室, 成都 610064
摘要 : 该文主要研究了强化融合蛋白lhFVII-LDM对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用。通过PCR和重叠PCR的方法构建了pET19b-lhFVII-LDP表达载体， 重组质粒转化BL21， 经IPTG诱导后表达并用Co2+亲和层析纯化lhFVII-LDP融合蛋白， Western blot检测融合蛋白的正确性， 再通过分子重组的方法将lhFVII-LDP与力达霉素(LDM)的活性发色团(AE)组装成为强化融合蛋白lhFVIILDM。通过免疫共沉淀实验鉴定lhFVII-LDP与组织因子(TF)的特异性结合作用， 利用平板克隆形成实验观察lhFVII-LDM对细胞增殖的影响， 采用Hoechst33342染色检测lhFVII-LDM诱导MDA-MB-231细胞凋亡情况， 建立了人乳腺癌裸鼠肿瘤模型， 研究lhFVII-LDM对MDA-MB-231肿瘤生长的抑制作用。结果显示， lhFVII-LDM强化融合蛋白在体外能很好的诱导MDA-MB-231细胞凋亡， 动物实验结果表明， 强化融合蛋白对MDA-MB-231肿瘤的生长具有显著的抑制作用。
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