果蝇来源的GPCR Methuselah G蛋白偶联信号转导通路研究
张 静1,2 张 儒1 叶晨立1,2 谢 欣1,2*
1上海市信号转导与疾病研究重点实验室, 同济大学生命科学与技术学院, 上海 200092; 2中国科学院上海药物研究所国家新药筛选中心, 上海 201203
摘要 : Methuselah(MTH)是果蝇来源的GPCR中的一员， 它的突变可延长果蝇平均寿命并提高果蝇对外界胁迫因素的耐受性。但目前对MTH在细胞水平的信号转导研究鲜有报道。该研究用稳定表达MTH的HEK293细胞株， 对与该受体偶联的G蛋白选择性做了研究。首先， 用免疫荧光染色、Western blot及钙流实验验证了MTH在HEK293/Myc-MTH细胞表面能稳定表达， 且具有正常生物学活性; MTH受体被其配体N-stunted活化后所引起细胞内钙的上升不能被PTX预处理抑制， 提示活化的MTH可能通过与Gq/11而非Gi/o蛋白相偶联; 进一步研究发现， MTH激活后不显著改变细胞中的cAMP水平， 表明MTH不与Gs和Gi/o相偶联; MTH被激活后可引起ERK磷酸化。这些结果提示:MTH可能是Gq/11蛋白的偶联受体， 为进一步研究MTH的下游信号转导和生物学功能奠定了基础。
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