TAT细胞穿透肽融合小鼠SurvivinT34A重组蛋白的原核表达纯化及其细胞转导效能研究

摘要 : 为研究细胞穿透肽TAT融合小鼠存活素T34A (survivinT34A)重组蛋白(TAT-msvT34A)转导细胞的效能， 该实验将表达TAT-msvT34A的原核表达载体pTAT-msvT34A转化大肠杆菌表达株E.coli BL21(DE3)， 异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导， 表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。通过亲和层析、离子交换柱层析、分子筛等步骤纯化， 得到TAT-msvT34A融合蛋白的纯度可达98%。纯化的融合蛋白用异硫氰酸荧光素(FITC)标记(FITC-TAT-msvT34A)后， 分别转导HepG2、TC-1、B16及HEK293细胞株， 流式细胞仪检测显示， 较低浓度的重组蛋白即对HepG2、TC-1、B16及HEK293等细胞株具有较高的转导效能， 在100 nmol/L时的转导效率均可达到60%以上， 作为对照， FITC标记的牛血清白蛋白(FITC-BSA)在100 nmol/L时对上述细胞株的转导效率极低， 结果具有显著性差异(P<0.01)。荧光显微镜观察可见， 50 nmol/L和100 nmol/L的TAT-msvT34A融合蛋白对HepG2细胞的转导效率均可达50%， 而对照FITC-BSA对HepG2细胞几乎无转导。表达纯化的TATmsvT34A融合蛋白对HepG2、TC-1、B16及HEK293等细胞株均有较高的转导效能， 可以用于后续
    抗肿瘤研究。