靶向山羊痘病毒DNA聚合酶基因shRNA质粒表达载体的构建及筛选

王安涛^1,3　陈创夫^1*　乔　军^1*　张　辉²　张　娜¹　胡圣伟²

¹石河子大学生命科学学院, 石河子 832003; ²石河子大学动物科技学院, 石河子 832003; ³新疆民族与地方高发病教育部重点实验室, 石河子 832003

摘要 : 本研究针对山羊痘病毒基因组高度保守的DNA聚合酶区段，选取了5个干扰靶位点。根据RNAi技术原理，构建了包括对照在内的6个shRNA重组表达质粒，转染细胞后接种病毒，通过细胞毒液的TCID50测定和用实时荧光定量PCR检测siRNA重组质粒对羊痘病毒DNA聚合酶基因表达的抑制作用。结果显示，重组表达质粒组的抑制率在63%以上，其中以pSI-W2最为明显，抑制率为93.8%。该研究应用RNAi技术在细胞水平筛选出了能够高效抑制山羊痘病毒增殖的干扰片段，为抗山羊痘病毒转基因羊的研究奠定了基础。