用Fugene6制作高滴度慢病毒方法的优化比较
范霖1 马志昭2 高山峨1 路建伟3 李思光1 潘晓静1*
1同济大学医学院胚胎干细胞研究中心, 上海 200092; 2河北医科大学第二医院神经外科, 石家庄 050000;3同济大学医学院胚胎干细胞库, 上海 200092
摘要 : 针对实验室中比较普遍的包装的慢病毒滴度不高的问题， 我们对慢病毒包装过程中的几个关键步骤进行了优化。采用Fugene6同时转染携带GFP的质粒和包装慢病毒所必需的包装质粒进入293T细胞中。通过使用荧光显微观察GFP的表达亮度及流式细胞技术测量GFP阳性细胞的比例来测定病毒滴度。通过优化Fugene6和DNA的比例， 发现当Fugene6和DNA的比例是3:1时获得的慢病毒的滴度最高; 通过对转染后收获病毒的时间的比较， 发现转染48小时后回收所得到的慢病毒滴度最高。
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