GDNF 慢病毒载体感染食蟹猴骨髓间充质干细胞

王玉兰¹　徐艳玲²　任振华^{2 ,3*}

¹首都医科大学宣武医院中心实验室, 北京100053; ²首都医科大学宣武医院细胞生物室, 北京 100053;³ 安徽医科大学人体解剖学教研室, 合肥 230032

摘要 : 骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells， MSCs)是基因工程和细胞治疗的种子细胞之一，本研究利用含胶质源性神经营养因子(glial cell derived neurotrophic factor， GDNF)基因的慢病毒载体感染成年食蟹猴MSCs，探讨转染后GDNF在MSCs中的体外表达水平及其影响因素。首先，通过密度梯度离心法分离食蟹猴骨髓单核细胞(marrow mononuclear cells， MNCs)，体外培养食蟹猴MSCs。同时构建表达GDNF 的慢病毒载体，并感染食蟹猴MSCs，分别利用酶联免疫吸附(ELISA)方法和Real-time PCR 方法，测定感染不同拷贝数病毒和不同转染组细胞GDNF 的蛋白分泌水平和基因表达水平。实验结果显示，表达GDNF基因的慢病毒载体成功转染成年食蟹猴MSCs，体外培养的MSCs 持续表达分泌GDNF。感染慢病毒的拷贝数可以影响GDNF 分泌水平，相同条件下感染拷贝数越高， GDNF分泌量越多，其基因表达水平越高。