重组荞麦蛋白酶抑制剂 aBTI 的表达及其对肝癌 HepG2 细胞增殖的影响

摘要 : 为了深入研究不同类型荞麦蛋白酶抑制剂在抑制肿瘤细胞生长及诱导其发生凋亡方面的作用， 本实验在先前得到的重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)的基础上， 运用定点突变技术将rBTI的活性位点进行替换， 构建一种新型蛋白酶抑制剂aBTI。通过在大肠杆菌M15 [pREP4]中表达， 获得以可溶形式存在的aBTI 目的蛋白。经Ni2+-NTA 亲和层析及superdex 75 分子筛层析纯化， 目的蛋白的纯度达到95% 以上。抑制活性测定表明， aBTI 具有专一性的弹性蛋白酶抑制活性， 抑制常数Ki 为3.34×10-7mol/L。MTT 比色法检测及细胞核形态学观察显示， aBTI 在体外能够显著抑制HepG2肿瘤细胞的增殖(IC50:1.88μmol/L)， 并诱导其凋亡， 具有较好的抗肿瘤效应。