人CD147的克隆表达及其对成纤维细胞基质金属蛋白酶表达的影响

摘要 : CD147可以促进基质金属蛋白酶(MMPs)的表达，与肿瘤的生长和浸润有关。为了研究CD147在大肠癌中的作用，利用RT-PCR从一健康人克隆了cd147基因，测序发现该基因存在两个碱基突变，其中C634T造成了CD147跨膜区212位氨基酸由L突变为F。分别构建CD147的原核(pGEX-5x-147)和真核(pEGFP-147)表达系统，在宿主菌BL21和CCL229细胞中均获得了稳定表达。Western印迹显示原核表达产物比真核CD147分子量小，说明原核CD147缺乏糖基化。荧光显微镜显示真核CD147表达定位于CCL229细胞膜，表明突变L212F不影响CD147的膜定位。用明胶电泳检测表达的CD147对MMPs表达的影响，结果显示原核产物不能诱导MMPs表达上调，而真核产物能够明显诱导MMPs表达上调，说明糖基化对于CD147活性是必需的，真核系统能够表达具有生物功能的CD147，并且突变L212F不会影响蛋白质的活性。