三叶青总提取物对人γδT细胞功能影响

该文旨在研究三叶青总提取物(TH-t)对人γδT细胞功能的影响。用80%的乙醇提取三叶青干块根中的三叶青总提取物; 利用Ficoll分离液分离人静脉血单个核细胞(PBMC)。用异戊烯焦磷酸法进行γδT细胞定向诱导培养。应用流式细胞分析技术检测PBMC培养前后的γδTCR表面标记率, 用荧光标记的单克隆抗体检测γδT细胞表面CD107a、granzymeB和Perforin的百分数。用乳酸脱氢酶释放法检测TH-t诱导后的γδT细胞对肿瘤细胞株杀伤活性。用CCK8法检测TH-t对γδT细胞增殖能力。用MTT法检测TH-t对肝癌(HepG2)细胞株、胃癌(SGC-7901)细胞株和乳腺癌(MCF-7)细胞株的抑制率。PBMC培养前γδTCR表达率为3.12%, 定向培养10天后为90.46%。在TH-t对γδT细胞增殖能力影响的实验中, 经过诱导72 h后, 浓度为0.62 μg/mL的TH-t促使γδT细胞增殖最明显(增长率为44.50%), 显著高于对照组(3.50%)(P<0.05)。当TH-t浓度为0.15 μg/mL时, 诱导的γδT细胞表面Perforin和granzymeB的阳性表达率可达到最高值, 分别为76.90%±2.30%和30.50%±1.30%), 显著高于对照组(65.40%±1.29%和25.10%±2.30%), 组与组之间的比较均存在统计学差异(P<0.05)。经浓度为0.125 μg/mL TH-t诱导后的γδT细胞对肿瘤HepG2、SGC-7901和MCF-7细胞株的杀伤活性最高(分别为72.10%、52.30%和79.10%), 显著高于对照组(分别为38.50%、30.50%和41.20%), 各组间的比较存在统计学差异(P<0.05)。当Th-t浓度≥9.75 μg/mL时, 对3株肿瘤细胞均有抑制作用。TH-t即能促进γδT细胞增殖又能提高其杀伤肿瘤细胞活性; 一定浓度的TH-t能抑制肿瘤HepG2、SGC-7901和MCF-7细胞株的生长。