肺炎克雷伯菌耐氨基糖苷类抗生素基因 aac(3)-I的改构与功能

摘要 : 研究氨基糖苷乙酰转移酶基因aac(3)-I碱基变异与功能的关系。构建表达载体pET28a-aac(3)-I， 转化感受态细胞E.coli BL21(DE3)， 筛选到阳性克隆送测序。然后在体外对aac(3)-I基因进行易错PCR改造， 筛选到一株阳性克隆测序后发现7处碱基变异， 其中C272T、T373C引发了氨基酸的变异， 分别对应: Ser91Phe、Tyr125His。以琼脂稀释法检测不同克隆的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration， MIC)。实验结果表明变异株MIC较突变前下降64倍(庆大霉素)、4倍(阿米卡星)、8倍(依替米星)。为进一步了解和阐明耐药酶AAC(3)-I与底物的作用机制打下基础。