一种简便的小鼠精原干细胞分离培养方法

宋锐曹鸿国^* 陶勇张运海刘亚黄伟玲孙雪萍殷慧群章孝荣

安徽农业大学动物科技学院, 安徽省地方畜禽遗传资源保护与生物育种省级重点实验室, 合肥 230036

摘要 : 采用一步酶消化法分离小鼠精原干细胞，比较a-MEM、DMEM培养基对体外培养的精原干细胞生长状态的影响，对精原干细胞集落进行形态观察、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase， AKP)染色和免疫组化鉴定，并诱导精原干细胞向精子细胞分化。结果显示，以小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层，用a-MEM培养的精原干细胞集落较大且呈葡萄串状或念珠状，细胞状态较好; 小鼠精原干细胞集落的AKP染色阳性呈紫红色; 在红色荧光下精原干细胞集落的Oct-4核蛋白表达为阳性、膜蛋白c-Kit、b1-integrin和Gfra-1表达为阳性; 精原干细胞经维甲酸(all-trans-retinoic-acid， RA)诱导可初步分化成精子样细胞。因此，采用一步酶消化法能够分离小鼠精原干细胞， a-MEM更适合小鼠精原干细胞体外培养。