小鼠基因功能研究及疾病模型系列专题(二)——基因工程小鼠的品系管理及基因型鉴定

摘要 : 实验室基因工程小鼠品系的保存大多是通过和野生型小鼠交配， 然后不断鉴定、选择携带基因突变或转基因的后代来实现。因此， 维持一个基因工程小鼠品系， 必须要通过分子生物学手段不断的鉴定小鼠的基因型。以基因剔除小鼠为例， 一般我们需要设计两组不同的PCR引物， 分别用于扩增野生型小鼠和突变型小鼠的基因组DNA片段。用于扩增野生型基因组DNA的PCR两个引物至少有一个来自于被剔除的区域DNA序列， 这样对于基因剔除小鼠纯合子个体基因组DNA， 利用这对引物将无法得到扩增产物; 用于扩增突变型小鼠基因组DNA， 我们一般在被剔除片段的两端设计PCR引物。由于被剔除的片段大多有成百上千个碱基， 这样通过PCR产物大小可以明显区分突变型小鼠和野生型小鼠来源的DNA片段(野生型小鼠相应片段常常由于过长而不被扩增)。一般来说， 用于基因型鉴定的PCR产物大多在300~800 bp左右， 最好能将野生型基因鉴定PCR产物大小和突变型基因鉴定PCR产物大小分开， 这样在观察电泳结果时可以一目了然。