重组创伤弧菌溶细胞素诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用及其机制

王　波　丁　卉　谢旦立　楼永良^﹡　严　杰¹　杨　军　赵志超

温州医学院检验医学院, 浙江省医学遗传学重点实验室, 温州325035;¹浙江大学医学院病原生物学教研室, 杭州310031

摘要 : 为了研究重组创伤弧菌溶细胞素(rVvhA)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的作用及其机制。采用 MTT法、普通光学显微镜和电子透射电镜、流式细胞仪结合Annexin V-PI标记法、caspase活性检测等方法测定rVvhA诱导HUVEC凋亡的作用。结果显示rVvhA能够抑制HUVEC生长。3.0溶血单位(HU)/ml和4.0 HU/ml的rVvhA作用HUVEC 8 h后，细胞和线粒体的形态发生凋亡改变，其中4.0 HU/ml处理组的凋亡率(51.73?.96)%高于对照组(3.53?.64)%和3.0 HU/ml处理组(12.83?.00)%，具有剂量依赖性; 4.0 HU/ml rVvhA诱导HUVEC凋亡过程中， caspase-3、caspase-9活性增加，并且具有时间依赖性，而caspase-8活性没有明显改变; 4.0 HU/ml rVvhA加caspase-3抑制剂Ac-DEVD-FMK或caspase-9抑制剂Ac-LEHD-FMK的凋亡率分别下降到(14.2?3.47)%、(24.93?.93)%。同时caspase-3、caspase-9活性也下降。结果表明rVvhA具有诱导HUVEC凋亡的生物学活性; 其机制可能与依赖caspase的线粒体途径有关。