GuPIP1抗体的制备及其在GuPIP1组织定位上的应用

摘要 : 利用PCR技术， 从甘草质膜水通道蛋白1 (plasma membrane intrinsic protein 1 from Glycyrrhiza uralensis Fisch， GuPIP1)的cDNA中扩增其保守区段(420 bp)， 并将其构入pGEX-KG。酶切、测序分析表明， 重组质粒pGEX-GuPIP1结构正确。IPTG诱导表达分子量约40 kDa融合蛋白GST-GuPIP1， 该蛋白质主要以非包涵体的形式存在于大肠杆菌中。诱导表达后的菌体超声裂解液经谷胱甘肽亲和层析纯化得到高纯度的GST-GuPIP1，
    以纯化的融合蛋白为抗原免疫兔子制备甘草质膜水通道蛋白的抗体。抗血清经过纯化后以酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA)和Western印迹检测抗体的效价和特异性。结果表明， 抗体具有高的效价和特异性。免疫组织细胞化学定位表明， GuPIP1在胚根根尖的表皮细胞和根冠细胞中强烈表达。