猪肝细胞和培养上清液中猪内源性逆转录病毒的检测

田鹏鹏¹　陈　钟^1,2*　黄　华 ²　吴振宇²　沈洪薰²　李根喜¹　丁义涛³

¹南京大学生命科学学院，医药生物技术国家重点实验室，南京210093；²南通医学院附属医院普外科，南通226001；³南京大学医学院附属鼓楼医院肝胆外科，南京210008

摘要 : 建立了猪肝细胞及其培养上清液中猪内源性逆转录病毒(PERV)的检测方法，探讨了其在猪肝细胞生物人工肝应用中的意义。以 PERV gag基因为靶序列，选用特定的引物，PCR检测中国实验用小型猪肝细胞 PERV前病毒DNA；RT-PCR检测猪、犬、大鼠以及HBV阳性病人血清和猪肝细胞培养6 h、24 h时的上清液PERV RNA，同时检测猪肝细胞猪线粒体DNA(mtDNA)。研究结果表明：检测 5份中国实验用小型猪血清、肝细胞及培养猪肝细胞24 h时的上清液PERV均为阳性，而5份培养猪肝细胞6 h时的上清液、5份犬血清、5份大鼠血清和5份HBV阳性病人血清PERV检测结果均为阴性，猪肝细胞中均可检测到猪mtDNA 。因此，中国实验用小型猪肝细胞携带PERV；PERV可释放到血清中；猪肝细胞培养 24 h后该病毒颗粒已释放到培养液中；PCR和RT-PCR方法检测PERV 具有特异性强、简便的特点。