人肝脏辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达与细胞内定位

摘要 : 应用杆状病毒蛋白表达系统在Sf9细胞中对人肝脏辅酶II依赖性视黄醇脱氢 /还原酶(NADP-dependent retinol dehydrogenase/reductase，NRDR)进行表达。以纯化的重组蛋白质为材 料，分析NRDR的催化活性和酶促反应性质。结果证实，人肝脏 NRDR具有视黄醛还原酶活性，在辅酶Ⅱ存在条件下其催化视黄醛还原成视黄醇的 K_m值和V_max值分别(2.8 ±0.24) mM和(0.468±0.036) mmol/(min·mg)。构建删除和不删除羧基端过氧化物酶体定位信号 SRL序列的NRDR绿色荧光蛋白报告基因表达载体。转染HeLa 细胞后，应用免疫荧光双染色的方法分析NRDR细胞内定位。结果 表明NRDR定位在细胞内过氧化物酶体。羧基端SRL序列对NRDR 定位到过氧化物酶体是必需的，删除SRL序列的NRDR分布在细胞质中。因此，人肝脏 NRDR是存在于过氧化物酶体中的辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶。