原代大鼠海马神经元的高效转染

苗宏生^1,2，余路阳²，林　波²，武家才²，郭礼和^2*，惠国桢^1*

¹苏州大学附属第一医院神经外科，苏州215006； ²中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，上海200031

摘要 : 用原代大鼠海马神经元为模型，对新型电转染方法Nucleofector™与脂质体DOTAP和Lipofectaimine™的转染效率和转染前后细胞存活率进行比较研究，探讨Nucleofector™的高效性与可靠性。从E18胎鼠海马中取出神经元进行体外培养，并用神经微丝(NF)抗体进行免疫细胞化学染色鉴定细胞类型。分别用DOTAP， Lipofectamine™ and Nucleofector™包裹pCMV-eGFP质粒转染原代大鼠海马神经元。神经元的存活率用流式细胞仪检测。实验结果表明：DOTAP 和 Lipofectamine™的基因转染效率仅为1.55％和2.45％，而Nucleofector™的转染效率则超过20％；细胞转染前后的存活率在DOTAP组分别为98.37％和88.35%，Lipofectamine™组分别为98.37％和90.11％，而在Nucleofector™组中分别为98.37％和51.82%。上述实验数据表明：Nucleofector™转染技术能高效并安全地转染原代大鼠海马神经元，但死亡率较高。