大肠杆菌yijP侵袭蛋白诱导人脑微血管内皮细胞凋亡

摘要 : 为研究大肠杆菌的脑微血管内皮细胞侵袭基因 yijP的功能，将yijP基因(1.04 kb)克隆到pQE30表达载体，构建表达产物为N末端带有6个组氨酸 (His)序列的yijP汇合蛋白，以M15(pREP4)为受体菌，大量表达( His)6-yijP汇合蛋白，利用Ni-NTA亲和层析纯化汇合蛋白 ， 将经透析法复性的一定浓度的(His)6-yijP蛋白加入到体外培养的人脑微血管内皮细胞中，结果显示 yijP蛋白对人脑微血管内皮细胞有较强的细胞毒作用：在相差显微镜下可观察到细胞皱缩、胞膜呈泡状膨出，随着时间延长细胞逐渐脱落; 荧光显微镜下可见细胞核呈现为致密团块状或圆形浓染颗粒状，呈凋亡样改变；DNA琼脂糖凝胶电泳可见DNA阶梯状条带; 流式细胞仪显示在正常二倍体峰之前出现一个亚二倍体峰； Western 印迹可检测到caspase-3的活性片段。这些现象均出现在yijP 蛋白作用于人脑微血管内皮细胞的16 h之后，提示在大肠杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞过程中， yijP蛋白可能起到诱导脑微血管内皮细胞迟发性凋亡的毒素作用。