一种利用STO饲养层细胞制备拟胚体的新方法

胡若真　周庆军　邵健忠^*　项黎新　张　铭　张念慈陆永良¹　姚　行¹　戴利成¹

浙江大学生命科学学院，杭州 310012，¹湖州市中心医院，湖州 313100

摘要 : 建立了一种利用STO饲养层细胞制备拟胚体的新方法。该方法选用生长至80%饱和密度的STO细胞，经丝裂霉素C（10 mg/ml）处理4 h后以8×104 cm^-2的密度接种培养12 h，制备饲养层，再将ES-D3细胞以1×104 cm^-2的密度接种其上，首先用含mLIF的DMEM培养液培养24 h，再更换拟胚体诱导培养液，5～9天后获得了各成熟阶段的拟胚体。形态结构和分化潜能等研究表明，该方法制备的拟胚体结构典型，具有产生3个胚层谱系来源的功能细胞的潜能。与传统拟胚体制作方法如悬滴培养法相比，具有操作简便，拟胚体形成率高，重复性好等优点，是开展哺乳动物早期胚胎发育和干细胞分化研究的理想工具。