OST-B通过介导GDF15糖基化修饰促进肺癌细胞增殖
杨翠1 杜明远2 刘鑫男1 田娜3 徐湛1 李鹤成2* 戴雪喻1* 李斌1*
(1上海交通大学医学院上海市免疫学研究所, 上海 200025; 2上海交通大学医学院附属瑞金医院胸外科, 上海 200025; 3上海交通大学医学院附属第六人民医院风湿免疫科, 上海 200233)
摘要 :
该研究旨在探讨OST-B在GDF15糖基化修饰中的关键作用及其对肺癌细胞增殖的影响。通过生物信息学分析和临床样本验证, 发现GDF15蛋白高丰度与肺癌不良预后密切相关。利用质谱鉴定蛋白修饰位点并结合体外糖基化实验, 确定GDF15在第70位天冬酰胺残基上存在N-糖基化修饰。在肺癌细胞A549细胞系中敲低GDF15后引入同义突变的GDF15野生型和糖基化位点突变型, CCK-8结果显示GDF15的糖基化修饰显著影响其促进肿瘤增殖的能力。进一步的质谱结果和Co-IP实验双重验证了GDF15与OST-B介导的糖基转移酶复合体(包括RPN1、DDOST和STT3B)之间的相互作用。通过敲低OST-B核心催化亚基STT3B, 发现糖基化修饰的GDF15蛋白丰度显著下降, 证明GDF15的N-糖基化修饰由OST-B介导。进一步通过蛋白合成抑制剂CHX和OST抑制剂NGI-1处理, 表明糖基化修饰能够提高GDF15蛋白的稳定性。对A549细胞系进行CCK-8、克隆形成和划痕实验, 结果显示NGI-1显著抑制了细胞的增殖和迁移。过表达GDF15后, NGI-1的抗肿瘤作用进一步减弱, 敲低GDF15后NGI-1的抑制效应更加显著。这些都表明, 除GDF15外,NGI-1的抗肿瘤效应还存在着其他作用途径。综上所述, 该研究揭示了OST-B通过糖基化修饰稳定GDF15, 并指出GDF15在肿瘤细胞增殖中的关键作用, 为肺癌的早期诊断和靶向治疗提供了新的思路。
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