斑马鱼cdk7和cyclin H基因的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

储　琳^1,2　刘清云¹ 　钱　旻²　严缘昌^1,3　李逸平 ^1*

¹中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，上海200031； ²华东师范大学生命科学学院，上海200062；³上海高校模式生物E-研究院，上海200031

摘要 : 构建了两个表达斑马鱼cdk7 (基因片段)和cyclin H(基因全长)的重组质粒，分别转化大肠杆菌BL21进行原核表达，所得的CDK7和cyclin H两个融合蛋白均以包涵体形式存在。经SDS-PAGE分离，切下含有目的蛋白条带的凝胶冻成干粉，分别免疫新西兰大耳兔，制备并纯化了分别抗CDK7和抗cyclin H的两个多克隆抗体。经酶联免疫吸附测定、蛋白质印迹分析检测，确定获得了两种具有较高效价的特异性多克隆抗体。免疫荧光组织化学结果显示，CDK7和cyclin H这两个蛋白质均普遍存在于斑马鱼胚胎动物极的各个细胞中。