基于CRISPR/Cas9基因编辑系统构建敲除TSPAN4基因的非小细胞肺癌细胞系

利用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除TSPAN4基因, 构建TSPAN4基因稳定敲除的非小 细胞肺癌A549细胞株, 并检测其对A549细胞迁移、侵袭能力的影响, 为后期探讨迁移体在非小细 胞肺癌转移过程中的作用提供实验基础。以质粒pSpCas9(BB)-2A-Puro(px459)为载体, 与设计好的 引物连接后得到敲除载体px459-sgRNA-TSPAN4。以jetPRIME®为转染试剂, 将构建好的质粒转染 至A549细胞系, 嘌呤霉素筛选单克隆细胞株并使用Western blot实验鉴定A549细胞系中TSPAN4基 因的敲除效果, 细胞划痕实验和Transwell实验检测敲除TSPAN4基因对A549细胞迁移、侵袭能力的 影响。该研究成功构建了TSPAN4基因编辑质粒px459-sgRNA-TSPAN4。Western blot结果显示敲 除TSPAN4基因能够显著降低A549细胞株中TSPAN4蛋白表达量; 敲除TSPAN4基因对A549细胞迁 移、侵袭能力的影响在统计学上无显著性差异, 降低了N-cadherin的表达, 对E-cadherin表达的影响 不大。以上研究表明, 使用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了敲除TSPAN4基因的A549细胞系, 且单独敲除TSPAN4基因不会影响A549细胞迁移能力。