miR-32-3p通过靶向Smad3调节氧糖剥夺/再灌注损伤中的细胞活力

张傲琪^1,2赵海乐^2,3巴德仁贵^4,5 朱润秀^2,3 姚远^1,2,3*

( ¹内蒙古大学, 生命科学学院, 呼和浩特 010070; ²内蒙古大学人民医院, 神经内科, 呼和浩特 010017; ³内蒙古自治区人民医院, 神经内科, 呼和浩特 010017; ⁴包头医学院, 内蒙古自治区缺氧转化医学重点实验室, 包头 014060; ⁵包头医学院, 医学技术与麻醉学学院, 包头 014060)

摘要 :

该文探讨了miR-32-3p通过靶向Smad3调节氧糖剥夺/再灌注损伤中的细胞活力。通过利用SK-N-SH细胞构建了一个研究脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury, CIRI) 的氧糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation and reperfusion, OGD/R)模型。通过生物信息学预测miR-32-3p的靶基因并进行功能注释和筛选; 通过双荧光素酶报告实验、实时定量PCR、Western blot、CCK-8和活/死细胞检测等实验检测miR-32-3p通过靶向Smad3对细胞活力的影响。结果显示, Smad3是miR-32-3p的新靶点, 并且在SK-N-SH OGD/R模型中miR-32-3p表达上调。CCK-8分析表明, 与miR-32-3p抑制剂对照组和shNC组相比, sh-Smad3和miR-32-3p抑制剂+sh-Smad3组的细胞活力显著降低。随后, 活/死细胞活力测定进一步支持了这些结果。与抑制剂NC和shNC组相比, sh-Smad3 和miR-32-3p抑制剂+sh-Smad3组中可观察到更多以红色荧光表示的死亡细胞。与SK-N-SH细胞相比, OGD/R细胞的Lats2、Yap/Taz和Smad3水平降低。这些结果表明, 缺乏Smad3可能会抑制细胞活力。这些结果说明, Hippo信号通路中的Smad3、Lats2和Yap/Taz可能共同调节细胞活力。