应用CRISPR-Cas9技术构建NFIB敲除的膀胱癌细胞株及其转录组学分析

为了探究NFIB(nuclear factor I/B)基因在膀胱癌中的生物学功能, 该研究应用CRISPRCas9技术构建NFIB敲除的膀胱癌细胞株, 然后通过转录组学技术分析对照细胞NFIB-NC与NFIB敲除细胞株NFIB-KO-I和NFIB-KO-II之间的差异表达基因, 同时对其进行KEGG富集分析, 并通过Western blot和qRT-PCR技术对转录组学结果进行验证。结果显示, 与对照细胞NFIB-NC相比, NFIB敲除细胞株NFIB-KO-I中有134个差异表达基因, 其中上调基因62个, 下调基因72个; NFIB-KO-II中有131个差异表达基因, 表达上调和下调的基因分别为50个和81个。KEGG分析结果显示, 差异表达基因与PI3K-AKT信号通路密切相关, Western blot结果证实敲除NFIB基因后, 膀胱癌细胞中的p-AKT水平显著上调。qRT-PCR结果表明, 敲除NFIB后, ITGA4基因表达水平上调, TNC和ANGPT4基因表达水平下调。该研究初步揭示了NFIB基因在膀胱癌细胞中调控的分子信号通路, 也为后续研究NFIB基因介导膀胱癌发生发展的分子机制提供了依据。