绵羊皮肤成纤维细胞的分离培养和鉴定

胡馨予¹ 姚逸安¹ 俞可心¹ 胡情情¹ 姜俊芳² 蒋永清² 石国庆³ 万鹏程³ 代蓉³ 管峰¹*

(¹中国计量大学生命科学学院, 杭州 310018; ²浙江省农业科学院畜牧兽医研究所, 杭州 310021; ³新疆农垦科学院畜牧兽医研究所, 石河子 832000)

摘要 :

绵羊成纤维细胞的分离培养是羊毛发育相关基因功能研究及分子育种研究的重要基础技术和手段, 但是现有贴壁法和胰蛋白酶消化法分离培养所需时间长、效率低, 双酶消化法与差速贴壁筛选法对绵羊皮肤成纤维细胞的分离培养效果尚不清楚。该实验目的在于通过优化绵羊皮肤成纤维细胞分离培养过程, 提高培养效率和细胞纯度。采集新生羔羊的耳皮肤组织, 采用胰蛋白酶和I型胶原酶联合消化法进行绵羊皮肤成纤维细胞的原代分离培养, 培养2~3天后进行传代分离, 直至获得高纯度的成纤维细胞, 该过程用时约7天。免疫荧光鉴定结果表明, 获得的绵羊皮肤成纤维细胞纯度达100%。该实验采用优化的双酶消化法与差速贴壁筛选分离成纤维细胞, 提高了绵羊皮肤成纤维细胞分离培养效率, 大大缩短了培养周期, 提高了细胞纯度。