小鼠肠道固有层免疫细胞分离的方法及高参数流式分析

张苗苗¹ 李华萍² 赵娅娅² 边玮1 俞珺璟¹*

(¹中国科学院分子细胞科学卓越创新中心/生物化学与细胞生物学研究所, 上海 200031; ²共生菌、发育与健康中心, 中国科学院上海巴斯德研究所, 上海 200031)

摘要 :

流式细胞术是一种基于散射光信号和荧光信号对单个细胞或颗粒进行多参数高通量快速检测的技术, 在生物医学领域有广泛的应用前景。在免疫学相关的基础科研工作中, 流式细胞术亦是免疫表型及功能分析的重要手段。其中, 高质量的单细胞悬液制备是流式检测的关键步骤, 直接影响流式检测的结果。该研究选用一种较难制备的原代组织样本—小鼠肠道固有层, 选择两种酶解消化方法, 从细胞得率、活性、免疫细胞标志物等多个指标进行比较, 结果表明以胶原酶 VIII和DNase I为主的酶解方法更适用于小鼠肠道固有层免疫细胞的获取, 同时结合多参数配色方案, 实现了对肠道免疫细胞各主要类群的全面分析。该研究为揭示样品制备实验结果的影响提供了参考依据, 为准确分析小鼠肠道固有层免疫细胞类群提供了可靠的检测方法。