拟南芥酵母双杂交文库构建及ADPG1互作蛋白筛选

韩雪^1,2 王树芳³ 林金星^1,2*

(¹北京林业大学生物科学与技术学院, 北京 100083; ²北京林业大学林木育种国家工程实验室, 北京 100083; ³中国科学院植物研究所, 北京 100093)

摘要 :

纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶在植物果实发育和成熟过程中起着重要的作用。拟南芥开裂区多聚半乳糖醛酸酶1(ARABIDOPSIS DEHISCENCE ZONE POLYGALACTURONASE 1, ADPG1)是拟南芥角果开裂所必需的果胶酶, ADPG1在木质部的异位表达可以诱导拟南芥ccr1突变体病程相关(pathogenesis-related, PR)基因的表达。但ADPG1是如何促进ccr1释放激发子并诱导病害防御基因表达的尚不清楚。通过筛选其互作的蛋白, 可进一步探究ADPG1参与ccr1突变体激发子释放和诱导防御基因PR1表达的作用机制。该文以拟南芥野生型和突变体ccr1为材料, 通过提取总RNA, 分离mRNA, 合成双链cDNA, 依次构建酵母双杂交初级和次级文库, 构建诱饵载体pGBKT7-AtADPG1, 进行自激活检测, 与构建的次级文库共转化酵母感受态细胞, 筛选到1个与ADPG1 相互作用的候选蛋白AtGRP5, 为进一步研究其参与植物诱导防御反应过程奠定了基础。