PTEN通过抑制GCLM表达促进铁死亡

为探讨抑癌基因Pten在铁死亡中的作用及其潜在的机制, 该文将Pten基因缺失小鼠 胚胎成纤维细胞(Pten–/–)与其对照野生型细胞(Pten+/+)用不同浓度的铁死亡诱导剂(Erastin)处理, 或在Erastin处理的同时分别加入抗氧化剂、铁死亡抑制剂、坏死性凋亡抑制剂、凋亡抑制剂和 自噬抑制剂, 用CCK-8法检测细胞增殖能力; PI染色检测细胞死亡情况; 用流式细胞测量术检测 细胞脂质过氧化物水平, 组织细胞谷胱甘肽检测试剂盒检测谷胱甘肽水平; 蛋白质免疫印迹检测 PTEN、P-AKTs473、AKT和GCLM蛋白表达水平; RT-qPCR检测Gclm mRNA表达水平; Erastin处理 GCLM敲低组与对照组, 用CCK-8法检测细胞增殖能力。实验结果显示, 与对照组相比, Pten–/–细 胞对Erastin的耐受性增强(P<0.05); Erastin诱导的Pten+/+细胞死亡可以被抗氧化剂和铁死亡抑制 剂逆转, 不能被坏死性凋亡抑制剂、凋亡抑制剂、自噬抑制剂逆转(P<0.05); Erastin处理后, 与对 照组相比Pten–/–细胞中脂质过氧化物水平(铁死亡检测指标)降低(P<0.05), 这些结果表明PTEN缺 失能减弱细胞对铁死亡的敏感性。在机制上我们发现, 与对照组相比Pten–/–细胞中谷胱甘肽水平 升高(P<0.05), GCLM的mRNA和蛋白水平升高(P<0.05); Pten–/–细胞中敲低GCLM能增加细胞对 Erastin的敏感性(P<0.05)。综上所述, PTEN能够通过抑制GCLM表达来提高细胞内脂质过氧化水 平从而促进铁死亡发生。