原核和真核双表达载体的构建及功能分析

朱明慧李晓静王浩民乔可欣朱嘉懿赵春澎* 王小引*

(新乡医学院基础医学院, 新乡 453003)

摘要 :

为了构建能驱动重组蛋白在真核及原核表达系统同时表达的双表达载体, 该研究将T7启动子和T7终止子分别克隆到真核表达载体pIRES-EGFP启动子CMV下游和新霉素抗性基因上游, 构建双表达载体pIRES-CMV/T7-EGFP, 并进一步将增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)基因替换为人转铁蛋白(human transferrin, HTrf)基因, 构建得到pIRES-CMV/T7-HTrf载体。将构建成功的重组载体转染中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞和转化大肠杆菌(Escherichia coli, E. coli) BL21, 再利用荧光显微镜、流式细胞术及Western blot分析重组蛋白是否表达及其表达水平。荧光显微镜观察、流式细胞仪分析及Western blot检测显示eGFP和HTrf既能在CHO细胞中成功表达, 也能在大肠杆菌BL21中表达。该研究成功构建了在原核及真核表达系统中均可以表达重组蛋白的双表达载体。