猪脂肪酸结合蛋白4启动子的克隆及转录活性分析

刘可可^1,2 钟洁¹ 李红强¹ 张瑾² 东方阳¹* 毋文静²*

(¹河北科技师范学院农学与生物科技学院, 秦皇岛 066000; ²嘉兴学院生物与化学工程学院, 嘉兴 314000)

摘要 :

该研究旨在解析猪(Sus scrofa)脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因的转录调控机制, 并获得猪脂肪组织特异性启动子元件。以6月龄大白猪为材料, 通过荧光定量PCR结合Western blot证明了猪FABP4为脂肪组织特异性表达较强的基因, 并分析推断其核心启动子区位于−2115 bp—– 2066 bp; 克隆得到从起始密码子开始到其上游的870 bp、2 914 bp、5 060 bp片段, 分别构建了双荧光素酶报告载体并将其命名为pGL3-F-1 Kb/3 Kb/5 Kb, 分析发现pGL3-F-3 Kb在脂肪细胞中的活性最高, 而在非脂肪细胞中无活性; 通过与脂代谢密切相关转录因子(C/EBPα、KLF4和C/EBPβ) 共转染发现, C/EBPα正调控FABP4转录活性, 而KLF4和C/EBPβ负调控FABP4的转录活性。研究表明, 猪FABP4基因的起始密码子上游3 Kb片段具有脂肪组织特异启动子活性, 可以用于构建脂肪组织特异性基因修饰猪。