利用FRET技术研究小鼠PU.1和KLF7蛋白相互作用

李雯邵淑丽张珍珠谭茗金钊李金炜孙婴宁*

(齐齐哈尔大学生命科学与农林学院, 齐齐哈尔 161006)

摘要 :

PU.1和KLF7基因在多个组织中的表达具有相关性。在前脂肪细胞分化过程中, 两个转录因子都可以通过抑制PPARγ的表达而抑制脂肪形成。然而两者是否存在蛋白水平相互作用还不清楚。为了验证PU.1和KLF7在前脂肪细胞中的关系, 该研究构建了重组表达载体pECFP-N1-PU.1和pEYFP-N1-KLF7, 并瞬时转染到3T3-L1前脂肪细胞系中。利用激光共聚焦显微镜, 观察到PU.1和KLF7蛋白共定位于3T3-L1细胞核中。荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)实验分析显示, PU.1和KLF7之间有明显的能量共振转移。实验结果证实, PU.1和KLF7之间存在直接的相互作用关系, 为脂肪生成的调控机制研究提供新思路。