氧糖剥夺/恢复对A549肺泡上皮细胞焦亡的影响

王小燕肖宗懿易寒安雨轩宋娟陈菲王寿勇*

(重庆医科大学附属儿童医院麻醉科, 国家儿童健康与疾病临床医学研究中心, 儿童发育疾病研究教育部重点实验室, 儿科学重庆市重点实验室, 重庆 400014)

摘要 :

通过建立A549肺泡上皮细胞氧糖剥夺/恢复(oxygen-glucose deprivation/recovery, OGD/R)模型, 模拟临床体外循环中肺泡上皮细胞缺血–再灌注过程, 观察OGD/R是否引发A549细胞焦亡, 为进一步探讨CPB相关肺损伤发生机制提供参考。采用RT-qPCR法和Western blot法检测焦亡相关基因Caspase1、ASC、NLRP3、GSDMD的mRNA转录和蛋白质表达水平, 并进一步观察 Caspase1特异性拮抗剂VX-765对Caspase1、焦亡效应蛋白GSDMD、培养上清液中Caspase1焦亡效应产物IL-1β、IL-18表达水平以及细胞存活率的影响。结果显示与对照组相比, OGD/R后A549 细胞Caspase1活性增高(P<0.05), 焦亡相关基因Caspase1、ASC、NLRP3、GSDMD的mRNA和蛋白质表达均上调(P<0.05); 采用拮抗剂VX-765预处理后, 细胞焦亡相关蛋白Caspase1、GSDMD 表达量明显减少(P<0.05), 细胞培养上清液中焦亡标志产物细胞因子IL-1β、IL-18水平显著下降 (P<0.05), 细胞存活率得到恢复。该研究表明, 氧糖剥夺/恢复可诱导A549肺泡上皮细胞发生焦亡, 抑制细胞焦亡的发生对氧糖剥夺/恢复细胞模型具有保护作用。