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异硫氰酸苯乙酯经PI3K/Akt/mTOR途径抑制非小细胞肺癌细胞表达c-Myc和RPS19


胡军1 徐丽丽2 罗毅1 谢勇1 高文奎1 陈艳华2 王柏琦2*

(1南华大学附属第二医院心胸外科, 衡阳 421001; 2南华大学附属第二医院肿瘤血液内科, 衡阳 421001)
摘要 :

该研究旨在探讨异硫氰酸苯乙酯(PEITC)抑制人非小细胞肺癌细胞表达c-Myc和RPS19的分子机制。首先体外培养A549、H358和H1299细胞系, Western blot、qPCR检测细胞内核糖体蛋白S19(RPS19)和c-Myc的表达水平。10、30和50 μmol/L PEITC处理细胞后, Western blot检测细胞内RPS19、c-Myc、E-cadherin、Vimentin的表达水平以及PI3K/Akt、mTOR和S6K的磷酸化情况, 并通过构建pGL4.10-RPS19荧光报告基因载体检测RPS19启动子报告基因活性。随后采用c-Myc、PI3K/Akt以及mTOR抑制剂处理细胞, 分析细胞内RPS19、c-Myc表达变化。随后细胞内转染pcDNA3-cMyc-HA质粒过表达c-Myc, 观察其对细胞内RPS19表达的影响, 并采用siRNA沉默RPS19表达, 检测细胞内EMT相关分子E-cadherin、Vimentin表达以及细胞侵袭、迁移的变化。Western blot以及qPCR结果显示, A549和H1299细胞系中RPS19和c-Myc的表达水平均显著高于MRC-5细胞。采用不同浓度PEITC处理细胞后, 细胞内RPS19、c-Myc以及Vimentin表达水平显著降低, E-cadherin表达增高, PI3K/Akt、mTOR和S6K磷酸化水平减弱。PI3K/Ak、mTOR抑制剂均可显著降低细胞内RPS19和c-Myc表达。此外, c-Myc抑制剂也能够显著降低细胞内RPS19表达以及启动子报告基因活性。转染pcDNA3-cMyc-HA质粒后, 细胞内RPS19水平显著增高, 而沉默RPS19表达则可显著增强细胞内E-cadherin表达并抑制细胞的侵袭和迁移。PEITC能够抑制人非小细胞肺癌H1299细胞表达c-Myc和RPS19, 其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。