用于CD47靶向研究的细胞模型的构建

梅恩典¹ 沈俊杰² 陈雪娇² 钱程¹*

(¹浙江理工大学生命科学与医药学院, 杭州 310018; ²重庆精准生物产业技术研究院有限公司, 重庆 400000)

摘要 :

CD47是一个新的免疫检查点, 然而人源细胞广泛表达CD47, 且暂未发现CD47阴性的人源细胞, 使CD47靶向研究缺乏可靠的研究模型。该研究以中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞为基础, 制备人源CD47慢病毒, 进而感染CHO构建CHO-CD47细胞系。利用流式细胞术、反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)及生物结合检测, 对 CHO-CD47进行评估, 流式检测结果表明, CHO-CD47细胞表达人源CD47的阳性率为94.7%, 经冻融且10次传代后, CD47阳性率保持稳定(96.4%); RNA水平检测结果表明, CHO-CD47细胞中表达人源 CD47 mRNA; 此外, 蛋白水平检测结果显示, CHO-CD47细胞可成功结合人源CD47配体信号调节蛋白α(signal regulatory protein α, SIRPα)和信号调节蛋白γ(signal regulatory protein γ, SIRPγ)重组蛋白。综上所述, CHO-CD47细胞模型成功构建, 可用于CD47靶向研究的结合能力验证, 为CD47靶向研究提供可靠的研究模型, 为以CD47为靶点的癌症治疗研究提供一定研究基础。